北京普析通用紫外可见分光光度计仪器操作

北京普析通用紫外可见分光光度计仪器操作

对TU-19系列仪器的所有操作几乎都是与PC联机后通过UVWin软件进行的。在 对仪器进行操作前请通过UVWin软件使用说明书，详细了解UVWin的使用。本章只针 对双光束测量的特点作相关说明，并以三个真实的分析过程为例介绍使用TU-19系列 仪器的一般过程。

关于双光束测量

什么叫双光束

双光束紫外可见分光光度计在光路设计上采用两束能量基本一致的光同时分别对 样品和参比进行测量（如下图3-1所示，R和S分别为参比和样品两路光束），通过参 比光束实时反馈补偿测量系统的稳定性，提高仪器的稳定性和测量精度。

在仪器结构上，双光束仪器与准双光束和单光束最大的不同在于，双光束仪器的样 品室有两路光，可以同时在两路光上放置参比和样品

使用双光束仪器

双光束仪器在使用上和单光束（或准双光束）的差别在于：单光束仪器在校零和测 量时，分两次将空白和样品放入样品池架中进行测量；而双光束仪器则是将空白和样 品一次分别放入参比和样品两路池架中，然后进行校零和测量操作。

在进行暗电流校正时，双光束仪器的黑挡块只需要放置在样品光路的样品池架上 进行操作即可。

您可以通过下一节的几个实例来熟悉本机在实际测量中的操作。

实例应用

本节列举了 19最基本应用的三个实例

光度测量实例

维生素B1可以促进碳水化合物和脂肪的代谢，提供神经组织所需要的能量，防止 神经组织和退化。预防和治疗脚气病。而实际药厂出产的维生素B1品质检测需要 在400nm下测定其吸光度值，当其值不超过0.020时，为合格品。

应用TU-19系列进行维生素B1品质检测，需要使用UVWin软件对待测样品进行 光度测量，具体操作步骤如下：

① 试剂配置

首先取1g维生素B1溶于10mL去离子水中作为样品；然后，取两个干净配对的石 英比色皿,分别装上去离子水作为参比溶液。

② 仪器开机

先打开与TU-19系列双光束紫外可见分光光度计相连的计算机，进入Windows操 作环境。确认样品室中无挡光物后，再打开光度计的电源开关，开启UVWin操作软件, 仪器进入初始化过程。自检无误后，仪器进主工作程序。开机预热60mino

④暗电流校正

将随机附带黑挡块放入样品光路上的样品池中，使用UVWin的暗电流校正功能进 行仪器暗电流校正。暗电流校正完毕后取出黑挡块。

提示：进行暗电流校正可以消除仪器部分噪声，保证样品的测量结果更为准确。您不需要在

每次测量时都进行暗电流校正，一般在仪器环境发生变化时才必须进行仪器的暗电流校正，所 谓的环境变化主要是指：环境温度变化较大时、安装位置改变、做高吸收度样品时等。（建议您 在启动仪器预热后，在进行测量前进行暗电流校正，保证数据结果的准确性）。

⑤校零

将装有去离子水的两个配对石英比色皿分别放入样品光路样品池和参比光路样品 池中，然后合上样品室盖，按“校零”按钮进行校零操作，此时在软件主界面上方显示的 实时吸光度值应该为0.000 Abs或非常近似的值。

⑥样品测量

取出放置于样品光路样品池中的比色皿,倒掉去离子水，用维生素B1样品溶液清 洗至少3遍后盛入样品溶液。将盛有样品溶液的比色皿放置于样品光路的样品池架上， 合上样品室盖，按“开始”按钮进行测量。等待一次测量完成后，再次按“开始”可以测 量下一个数据。通过对多组测量数据取平均可以得到样品的测量结果。

⑦结果分析

对测量得到结果,您可以保存为UVWin专用的文件格式，方便日后打开查看，也可 以打印输出。

光谱扫描实例

维生素B12在361 nm处有特征吸收峰，因此在测量维生素B12光谱时，测量者对 该波长下的吸光度值比较关注。下面就以维生素B12为例说明如何使用光谱测量。

采用TU-19系列双光束紫外可见分光光度计对维生素B12进行吸收峰的测量步骤 如下：

①试剂配置

取标准维生素B12注射液，按照B12与去离子水1:10的比例混合得到10mL稀释 溶液。取两个配对石英比色皿，都倒入去离子水（去离子水作为参比溶液）。

②仪器开机

先打开与TU-19系列双光束紫外可见分光光度计相连的计算机，进入Windows操 作环境。确认样品室中无挡光物后，再打开光度计的电源开关，开启UVWin操作软件, 仪器进入初始化过程。自检无误后，仪器进入主工作程序。开机预热60min。