可见分光光度计样品分析方法及操作指南

可见分光光度计样品分析方法及操作指南

一、样品分析方法

1. ‌标准曲线法‌

‌标准溶液配制‌：配制5-8个不同浓度的标准溶液（浓度范围需覆盖待测样品预期值），按梯度稀释并贴标防止混淆‌。

‌显色处理‌：部分样品需加入显色剂（如总磷检测需钼酸铵显色）后静置至反应‌。

‌吸光度测定‌：在特征吸收波长下（如总磷检测用697nm）测量标准溶液吸光度，绘制浓度-吸光度标准曲线‌。

2. ‌直接比较法‌

‌单点校准‌：适用于已知线性关系的样品，用单一标准溶液计算样品浓度（公式：

�样=�样�标×�标C 样 = A 标A 样×C 标）‌。

二、操作流程

1. ‌实验准备‌

‌仪器检查‌：确认分光光度计处于稳定环境（温度15-30℃，湿度≤70%），清洁样品室及比色皿‌。

‌试剂准备‌：配制空白溶液（如蒸馏水或溶剂）及待测样品，确保无悬浮物‌。

2. ‌仪器校准与参数设置‌

‌开机预热‌：接通电源后预热≥10分钟（部分型号需30分钟），避免基线漂移‌。

‌波长设定‌：通过控制面板输入特征波长（如总磷用697nm）或按<GOTO λ>键直接跳转‌。

‌基线校正‌：放入空白溶液，按<AUTO-ZERO>或<ABS%>键调零‌。

3. ‌样品检测‌

‌装样要求‌：液体样品需澄清（必要时过滤），装入比色皿至3/4高度，外壁用擦镜纸清洁‌。

‌测量步骤‌：

将空白溶液放入光路，按<100%T>键调满度‌。

依次放入标准溶液和待测样品，记录吸光度值（按<START/STOP>键读数）‌。

‌重复测量‌：每个样品至少测3次，取平均值以提高精度‌。

4. ‌数据分析‌

‌标准曲线拟合‌：使用仪器软件或手动计算线性回归方程（y=kx+b），计算样品浓度‌。

‌结果验证‌：通过加标回收率或平行样检测验证数据可靠性‌。

三、关键注意事项

‌波长准确性‌：定期用标准滤光片（如钬玻璃）校准波长，误差需≤±1nm‌17。

‌比色皿使用‌：

玻璃比色皿仅适用于可见光区（350-1000nm），使用前后用乙醇清洗‌。

避免用手直接接触光面，防止指纹影响透光率‌。

‌干扰排除‌：

浑浊样品需离心或过滤，避免悬浮物散射光‌。

共存物质干扰可通过双波长法或背景扣除消除‌。

四、故障处理