可见分光光度计样品分析方法及操作指南
可见分光光度计样品分析方法及操作指南
一、样品分析方法
1. 标准曲线法
标准溶液配制:配制5-8个不同浓度的标准溶液(浓度范围需覆盖待测样品预期值),按梯度稀释并贴标防止混淆。
显色处理:部分样品需加入显色剂(如总磷检测需钼酸铵显色)后静置至反应。
吸光度测定:在特征吸收波长下(如总磷检测用697nm)测量标准溶液吸光度,绘制浓度-吸光度标准曲线。
2. 直接比较法
单点校准:适用于已知线性关系的样品,用单一标准溶液计算样品浓度(公式:
�样=�样�标×�标C 样 = A 标A 样×C 标)。
二、操作流程
1. 实验准备
仪器检查:确认分光光度计处于稳定环境(温度15-30℃,湿度≤70%),清洁样品室及比色皿。
试剂准备:配制空白溶液(如蒸馏水或溶剂)及待测样品,确保无悬浮物。
2. 仪器校准与参数设置
开机预热:接通电源后预热≥10分钟(部分型号需30分钟),避免基线漂移。
波长设定:通过控制面板输入特征波长(如总磷用697nm)或按<GOTO λ>键直接跳转。
基线校正:放入空白溶液,按<AUTO-ZERO>或<ABS%>键调零。
3. 样品检测
装样要求:液体样品需澄清(必要时过滤),装入比色皿至3/4高度,外壁用擦镜纸清洁。
测量步骤:
将空白溶液放入光路,按<100%T>键调满度。
依次放入标准溶液和待测样品,记录吸光度值(按<START/STOP>键读数)。
重复测量:每个样品至少测3次,取平均值以提高精度。
4. 数据分析
标准曲线拟合:使用仪器软件或手动计算线性回归方程(y=kx+b),计算样品浓度。
结果验证:通过加标回收率或平行样检测验证数据可靠性。
三、关键注意事项
波长准确性:定期用标准滤光片(如钬玻璃)校准波长,误差需≤±1nm17。
比色皿使用:
玻璃比色皿仅适用于可见光区(350-1000nm),使用前后用乙醇清洗。
避免用手直接接触光面,防止指纹影响透光率。
干扰排除:
浑浊样品需离心或过滤,避免悬浮物散射光。
共存物质干扰可通过双波长法或背景扣除消除。
四、故障处理
问题 | 解决方法 |
吸光度读数不稳定 | 检查电源稳定性,延长预热时间;清洁比色 |
基线无法调零 | 更换空白溶液或检查光路遮挡 |
透射比超100% | 透射比超100% |
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