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双剑合璧，智创未来丨安捷伦 Online 2D-LC 液相系统在治疗性抗体药物生产过程中的智慧应用
实验室的小伙伴们，应当对安捷伦提供的各种液相高端应用方案很熟悉了吧？多维液相色谱系统、全自动方法开发系统、超高效液相色谱系统、在线液相色谱系统等等，这些已经足够让大家在实验室细细品味。2025 新年伊始，已经过 50 多年磨砺与创新的安捷伦液相色谱产品，又给我们带来了全新的解决方案——Online 2D-LC 联用方案！今天满足你的好奇心，让我们赶紧启程，一睹为快！
2D-LC 液相应用于 mAbs 的滴度和聚集体分析
在单克隆抗体生产过程中，常用体积排阻色谱（SEC）技术监控 mAb 聚集体，这是 mAb 的关键质量属性（CQA）之一，因为聚集体会影响 mAb 的药效、稳定性和安全性。然而直接从细胞发酵液（HCCF）进行聚集体分析存在很大挑战，因为 HCCF 的基质特别复杂。为了克服这个问题，在 SEC 分析之前，需要用 protein A（ProtA）来纯化 mAb，同时也可以测定 mAb 的浓度（Titer）。这个过程通常需要花费 2-5 h。而当使用 Agilent 1290 Infinity III 2D-LC 系统时，一针进样 15 min 之内即可分析发酵液或者细胞培养基中 mAb 的 Titer 和聚集体[1]（图 1 和图 2）。
图 1. 2D-LC 进行 Titer 和 SEC 分析过程
图 2. 2D-LC 分析 mAb 的 Titer（1D Protein A）和聚集体（2D SEC）的色谱图
Online LC 液相应用于 mAbs 下游连续流纯化过程中 CQA 实时监控
安捷伦 Online LC 液相色谱系统作为过程分析技术（PAT）的一种高效分析工具，可实现生物制药的上游生产过程和下游纯化过程监控，是连续制造工艺过程的最佳拍档，同时也适用于批次生产过程的在线监控（图 3）。
图 3. 安捷伦 Online LC 解决方案
在 mAbs 下游连续流纯化过程中需要实时监控聚集体和电荷异构体，选择带四柱切换阀的 Online LC 系统可实现每间隔一定时间从纯化液中自动取样、在线过滤后分别进行 SEC 和 IEC 的在线分析。同时将 Online LC 作为下游连续流纯化平台的一部分，可实现对纯化工艺过程的自动优化[2]，整体框架如图 4：
图 4. 下游连续流纯化在线监控的整体框架示意图
Online 2D-LC 液相应用于 mAbs 生产过程中 CQA 实时监控
将上文中 2D-LC 和 Online LC 技术整合可得到 Online 2D-LC 系统，即通过 Online LC 将生产过程中的 mAbs 样品自动传输、前处理和进样[3]，然后通过 2D-LC 将 mAb 样品实现一维 Titer（图 5）和二维 SEC/IEC 分析（图 6）[4]。该系统可应用于 mAbs 上游生产过程和下游纯化过程中，得到更多实时 mAbs 的 CQA 数据，也为工艺参数优化提供更多的参考。
图 5. Agilent Online LC monitoring software 软件中显示一维 Titer 的变化图：蓝色曲线对应 2D 为 SEC 的 Titer 图；紫色曲线对应 2D 为 IEC 的 Titer 图
图 6. Agilent Online LC monitoring software 软件中二维的趋势图：蓝色曲线对应 2D 为 SEC 的趋势图；紫色曲线对应 2D 为 IEC 的趋势图
结语
Online 2D-LC 系统可精准实现在线分析、二维和分析项目自动切换等功能，而且还有强大的色谱软件 OpenLab CDS、Online LC monitoring software 和 DCS 软件的加持，使我们对在抗体药物的生产过程中的产品情况了如指掌。新年新旅程，如此轻松高效的工作流程，舍我其谁！
参考文献
[1] Bian Yulan. Coupling Affinity and Size Exclusion Chromatography in the Monoclonal Antibody Study Using the Agilent Infinity II 2D-LC System , AN：5994-3530EN, 2021.
[2] 张婷婷, 周影, 杨新磊, 陈波，程欢，钱天乐. Agilent InfinityLab 在线液相色谱应用于生物制药mAbs 下游连续流纯化工艺过程监控, AN：5994-7964ZHCN, 2024.
[3] Edgar Naegele, Daniel Kutscher, Lea Bonnington, Michael Leiss, and Andrés Martinez. Online LC Monitoring of Downstream Processing in the Production of Therapeutic mAbs, AN：5994-5186EN, 2022.
[4] Edgar Naegele. Multiple Critical Quality Attributes Assessment of mAbs for Process Control, AN：5994-5318EN, 2022.
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