安捷伦惰性材料齐上阵，加码 Native SEC-MS 分析

为评估 SEC 流路中是否存在不锈钢组件的影响，采用几种系统或色谱柱组合对 mAb 样品进行分析。结果显示磷酸钠在所有测试组合中均提供了令人满意的分离性能，HMW 物质的回收率良好。当用乙酸铵代替磷酸钠并降低流动相离子强度时，在流路中存在不锈钢组件的情况下，分离效果会受到不利影响。色谱柱硬件的影响使得不锈钢色谱柱与作为流动相的乙酸铵配合使用时，几乎无法检出 HMW 物质（如有）。当安装带 PEEK 内衬的色谱柱并使用 100 mM 乙酸铵运行时，HMW 物质重新出现。使用 50 mM 乙酸铵流动相（在 MS 灵敏度方面最有利）时，只有生物兼容性液相色谱系统与带 PEEK 内衬的色谱柱的组合（右下色谱图）能够检出 HMW 杂质，提供有用的结果。

图 4 进一步示出仪器对峰宽和拖尾的影响。当应用 1290 Infinity II 生物液相色谱系统时，峰宽始终较小。将磷酸盐流动相替换为与 MS 兼容的乙酸盐后，峰拖尾也不会增加。另一方面，当不锈钢液相色谱系统上的流动相改变时，峰宽和拖尾都会受到严重影响。降低流动相的离子强度会放大这种效应。

图 6 显示了维布妥昔单抗（一种半胱氨酸偶联的 ADC）的 SEC/UV/MS 分析结果。由于轻链和重链仅由非共价相互作用维持，因此如果使用传统的反相变性条件进行质谱表征是很难获得完整蛋白水平数据。使用Native SEC-MS进行表征，解卷积的谱图显示了药物分布和药物/抗体比率 (DAR)，以及主要的糖型信息。