赛默飞Thermo荧光分光光度计的操作流程

赛默飞（Thermo Fisher Scientific）的荧光分光光度计是一种用于测量样品荧光特性的仪器，常用于分析生物分子、药物、环境样品和其他化学物质。以下是其常规操作流程：

一、准备工作

1. 仪器检查与开机：

• 确保荧光分光光度计已经正确连接电源和计算机。

• 打开仪器电源，等待仪器自检和初始化完成。

• 打开相应的软件（通常是Thermo Fisher的控制软件）进行测量操作。

2. 准备样品：

• 样品的浓度和体积应根据实验需求进行适当准备。

• 如果样品需要稀释，使用适当的溶剂（如去离子水、缓冲液等）进行稀释，确保样品荧光强度在检测范围内。

3. 清洁比色皿：

• 使用无尘擦纸擦拭比色皿，确保其表面无指纹或污渍。

• 根据需要，选择合适的比色皿（通常为石英比色皿，适合紫外和可见光区的测量）。

• 用溶剂冲洗比色皿，避免样品残留。

4. 选择合适的激发和发射波长：

• 根据实验需要或文献参考，确定荧光激发波长和发射波长。

• 在软件中设置这些参数以进行测量。

二、操作步骤

1. 样品与空白测量准备

• 空白样品准备：

• 空白样品通常是与测量样品相同的溶剂或缓冲液，用于校准和消除背景干扰。

• 将空白样品注入比色皿，放入荧光分光光度计的样品槽。

• 测量空白：

• 在软件中选择“空白测量”功能，记录空白的荧光信号。这一步是为了校正背景信号，确保后续测量的精确性。

• 测量完成后，取出比色皿，清洁并准备加入实验样品。

2. 样品测量

• 加入样品：

• 将已准备好的样品注入清洁的比色皿，通常注入量为比色皿容积的2/3左右，避免过满或过少。

• 将比色皿放入荧光分光光度计的样品槽，确保放置稳固。

• 设置测量参数：

• 在软件中设定测量模式，如荧光光谱扫描、时间扫描或定量分析。

• 设置激发波长和发射波长，确保选择适合的荧光探针或标记物的波长。

• 测量：

• 点击“开始测量”按钮，仪器将自动激发样品并采集荧光发射数据。

• 数据会在软件中实时显示，包括荧光强度值及相应的光谱图。

3. 数据分析

• 结果查看：

• 测量结束后，软件界面会显示荧光强度、峰值位置和其他相关数据。

• 如进行光谱扫描，用户可以查看整个光谱的发射曲线，找到最大荧光峰值的位置。

• 数据保存与导出：

• 软件通常允许保存测量结果和导出数据，便于后续分析或实验记录。

• 可将数据导出为Excel、PDF或图形文件，以便进行进一步的分析或报告撰写。

三、测量完成后的清理与关机

1. 清理比色皿：

• 使用适当的溶剂或去离子水清洗比色皿，避免样品残留污染下次测量。

• 使用无绒纸或空气吹干比色皿，确保干燥后存放。

2. 清洁仪器样品槽：

• 若不慎将样品洒入样品槽，用适当的擦拭纸轻轻清理仪器内部，避免损坏光学系统。

3. 关机与仪器保养：

• 关闭软件并保存所有数据。

• 关闭荧光分光光度计电源，断开电源插头以确保安全。

• 定期进行设备校准和维护，确保仪器的长期准确性和稳定性。

四、常见问题及解决方法

1. 荧光信号过弱或无信号：

• 样品浓度过低，考虑适当增加浓度或延长激发时间。

• 激发波长或发射波长选择错误，确保选用合适的参数。

• 比色皿清洁不，检查比色皿表面是否有污渍影响光路。

2. 荧光信号过强或超出范围：

• 样品浓度过高，建议稀释样品。

• 减少激发光强度或降低PMT（光电倍增管）增益以避免饱和。

3. 基线漂移或背景噪音高：

• 重新测量空白，确保空白溶剂中无荧光物质干扰。

• 检查仪器内部光学系统是否清洁，清理样品槽。

五、总结

赛默飞荧光分光光度计操作简单、功能强大，是生物化学分析中的工具。通过合理的准备、设置与操作，科研人员可以获得高质量的荧光测量数据，为各类分子分析和研究提供坚实的基础。