赛默飞超微量分光光度计使用方法

赛默飞超微量分光光度计（如NanoDrop系列）是一种常用于测量DNA、RNA、蛋白质浓度的实验室仪器。其操作简单、测量快速、样品消耗极少，因此广泛应用于分子生物学实验中。以下是详细的使用方法，包括准备、操作步骤和注意事项。

一、准备工作

1. 设备检查：

• 确保分光光度计连接电源并打开设备。

• 检查设备是否已正确连接到计算机，软件是否安装并可正常运行（如NanoDrop软件）。

2. 样品准备：

• 确保样品充分混匀并适当稀释（如果浓度过高可能影响读数）。

• 样品通常为DNA、RNA、蛋白质或其他生物分子溶液。

3. 清洁检测平台：

• 使用无绒擦拭纸轻轻擦拭测量平台（光纤）和上臂，确保无灰尘和残留物，避免影响测量结果。

4. 选择适合的模式：

• 根据实验需求选择相应的测量模式，如核酸（DNA、RNA）模式、蛋白质模式、或其他特殊分析模式。

二、操作步骤

1. 打开NanoDrop软件

在计算机上打开NanoDrop软件，选择需要的测量模式（如核酸、蛋白质、A280等）。不同模式根据测量目标的不同会有所变化。

2. 校准设备（Blank）

每次测量前，使用空白样品进行校准。空白样品一般为纯水或与样品相同的缓冲液，校准步骤如下：

• 将1-2微升的空白液体滴在光纤平台上。

• 放下上臂，确保液体被夹在上臂和测量平台之间。

• 点击软件中的“Blank”按钮，设备将进行校准以消除背景吸光度。

3. 加入样品

校准完成后，按照以下步骤进行样品测量：

• 用移液器取1-2微升样品，准确滴加到光纤平台的中心位置。

• 轻轻放下上臂，使样品处于光纤间的检测区域。

• 在软件中点击“Measure”按钮，开始样品的测量过程。

4. 读取结果

• 测量结果会立即显示在软件界面上，包括吸光度（A260、A280）和核酸或蛋白质的浓度值。

• 如果是核酸测量，通常会提供A260/A280和A260/A230的比值，用于评估样品的纯度。

5. 清洁平台

每次测量完成后，都应使用无绒擦拭纸轻轻擦拭光纤平台和上臂，确保样品残留被清除，避免交叉污染。

三、数据保存与导出

• NanoDrop软件通常提供了数据保存和导出功能。在测量完成后，用户可以选择保存数据到电脑中，或导出为Excel或其他格式的文件，便于后续分析和记录。

四、注意事项

1. 样品体积：
   超微量分光光度计的设计允许使用极少量的样品，通常只需1-2微升。如果样品体积过少，可能导致检测不准确或无法进行测量。

2. 样品纯度：
   核酸的A260/A280比值应在1.8-2.0之间，如果比值偏离这个范围，可能表示蛋白质或其他杂质的污染。

3. 定期校准：
   建议定期使用标准溶液进行校准，以确保设备的测量精度。

4. 设备维护：
   长期使用后，应定期对光纤平台进行清洁，防止样品残留物影响读数。遵循厂家提供的维护指南可以延长设备使用寿命。

5. 样品稀释：
   高浓度样品可能超出仪器的线性检测范围，影响结果准确性。必要时，建议先稀释样品再进行测量。

五、常见问题与解决

1. 读数异常：

• 样品可能含有气泡或未充分混匀。

• 平台上残留有之前的样品。

• 样品浓度过高，需稀释后再测。

2. 低纯度比值（A260/A280或A260/A230）：

• 样品中可能含有蛋白质、酚类或其他污染物。需进一步纯化样品。

• 使用错误的空白液体进行校准，需确保空白液体与样品溶剂一致。

3. 平台残留液体：

• 每次测量后应立即清洁平台，避免样品干燥在平台上。

• 如果有残留难以清除，可以使用70%乙醇或去离子水湿润擦拭纸进行清洁。

六、总结

赛默飞超微量分光光度计是实验室进行生物分子浓度测定的强大工具，使用简单、快速且节省样品。在日常操作中，注意样品的准备、平台清洁和设备校准，可以确保获得准确的实验结果。