荧光分光光度计测试需要的几大步骤

2023年10月19日 17:14 来源：上海棱光技术有限公司

　　荧光分光光度计测试需要的几大步骤：

　　(一)样品准备

　　1.液体样品根据用户提供的技术指标，检查浓度范围是否合适，如果需要稀释，则要考虑所需溶剂类型和稀释倍数。

　　2.固体样品均匀粉末、片状或具有光滑平面的块状样品，均可直接测定。

　　(二)操作步骤

　　1.开机：接通电源，打开主机开关，点燃(打开)光源后，根据说明书要求启动计算机。

　　2.检测前准备：参照仪器说明书，在20天内至少进行一次激发校准和发射校准，检测前仪器应预热。

　　3.工作条件的选择：环境温度应在20℃±5℃;相对湿度不大于70%;电源稳定，无磁场、电场干扰。根据样品的特性及荧光强度，选择合适的仪器工作条件(如狭缝、PM增益、响应时间等)。

　　4.基本测定

　　(1)荧光激发光谱测定

　　设置仪器参数，扫描发射波长，找到maxλem，以此为发射波长，记录发射强度作为激发波长的函数，便得到激发光谱。

　　(2)荧光发射光谱测定

　　设置仪器参数，扫描激发波长，找到maxλex，以此为激发波长，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。

　　(3)差谱测定

　　设置荧光分光光度计参数，选择合适的工作方式，测定背景溶液的发射光谱并储存起来，在一定的工作方式下，扫描样品溶液的发射波长，得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值，即差谱。

　　(4)峰面积积分

　　选择适当的工作方式，对样品溶液进行积分操作，即得到峰面积积分。

　　(5)荧光强度

　　选择合适的测量参数，设置λex、λem，采用定点读数或扫描方式，即可测得所选波长处的荧光强度。

　　(6)定量测定

　　配制一系列已知浓度的标准溶液，在一定的测定条件下，设置λex、λem，按照由稀至浓的次序，测定标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度—浓度的工作曲线，不改变仪器参数测定未知溶液的荧光强度，由工作曲线即可求出未知溶液的浓度。

　　(三)分析结果的表述

　　1.荧光激发光谱、发射光谱以及其他光谱由仪器控制电脑直接绘出。

　　2.峰面积积分、荧光强度由仪器控制电脑计算显示。

　　3.定量测试：在相同的测定条件下，测定一系列已知浓度的标准溶液的荧光强度，绘制出荧光强度-浓度的工作曲线。浓度未知的溶液的荧光强度测定后，由工作曲线求出该溶液的浓度。

关键词：荧光分光光度计

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