超微量紫外/荧光全功能分光光度计在RNA质控的应用

RNA质控，我来帮你！
 
小编心里话：RNA质控是个技术活儿！
 
对于每天泡在实验室的人来说，qPCR已是家常便饭。毫无疑问浓度高，纯度好，片段完整，才是我们理想中的RNA样品。然而，RNA总是娇气的存在！室温或4度极易降解，提取的时候容易有污染物残留。因此完整的RNA质控包含了三个方面：浓度质控，纯度质控，片段完整性质控。
 
如何把控RNA质量，继续反转录呢？
 
有一款RNA质控的高手，既可以提供RNA浓度质控，也可以提供RNA纯度质控，没错，就是美国Denovix公司提供的DS-11FX超微量紫外/荧光全功能分光光度计，看上去酷酷的RNA纯度质控的标准方法是超微量分光光度计（光吸收）法，通过监控A260/230和A260/280的比值来判定RNA的纯度。通常A260/280的比值范围在1.8-2.0之间，如果大于2.0则说明RNA已经降解，如果低于1.8则说明含有蛋白质或其他杂质；而A260/230的比值如果小于2，则表明RNA中含有酚类，盐等杂质。DS-11FX的微量光度计功能可以帮助科研人员来准确的判定RNA样品的纯度。
 
下图为RNA紫外法检测示意图，A260/280和A260/230都不在正常的比值范围，说明RNA样品纯度很差，仪器会自动进行提示，两个黄色小三角就是警示图标哦，点击萌萌的黄色三角警示，仪器会显示污染物的种类，够智能吧，这就是DS-11的SmartQC功能

图1 总RNA的测量界面图（美国DeNovix，DS-11FX）
 
RNA浓度质控的标准方法是荧光法，除非是纯度很高的RNA也可以采用紫外法。荧光法采用RNA特异性染料，可以准确的测量RNA浓度。DS-11FX不但提供RNA浓度质控，也可以提供DNA和蛋白的浓度精确控制，功能超级强大哦。
 
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发表在Cell stem cell的文章PAX3 Confers Functional Heterogeneity in Skeletal Muscle Stem Cell Responses to Environmental Stress，作者提取卫星细胞的总RNA，采用DS-11FX超微量/荧光全功能分光光度计进行RT-PCR之前的RNA的质量把控和浓度鉴定。