紫外分光度法进行蛋白定量的实验方法

紫外分光度法进行蛋白定量的实验方法

蛋白定量是蛋白质检测过程中的重要环节，检测的方法有很多，有Bradford检测法、Bradford斑点试验法、Coomassie 斑点试验法、紫外分光度检测法。其中、紫外分光度法是蛋白质定量方法中比较快的一种方法。

一、紫外分光光度法进行蛋白定量的检测原理：

由于蛋白质分子对于不同光度波段的吸光率也有所不同，所以紫外分光度检测法主要通过光系统来检测蛋白分子的吸光率，从而确定蛋白质的浓度进行的蛋白定量。比如205nm的光波波长主要吸光为肽链分子。280nm波长下色氨酸与酪氨酸吸光率则这两种分子以为主。
 
二、蛋白定量中蛋白质溶液浓度的确定
1、纯蛋白质溶液：
a.在滤光波长为280nm的环境下对比其吸光率。
b.其中的抗体和BSA，估算公式为：蛋白质 A280 (1mg/ml)IgG =1.35； IgM=1.2； BSA=0.7。（单位/吸光率约等于1mg/ml） 

2、蛋白定量中核苷酸类的蛋白溶液浓度测定： 
a.在280nm和260nm或205nm光波长环境下对照其吸光率；
b.蛋白质浓度估算公式：
280nm波长：蛋白质浓度（mg/ml）=(1.55×A280 )-(0.76×A260 )
208nm波长：蛋白质浓度（mg/ml）= A205 /(27 + 120 A280/ A205 )

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