超微量分光光度计如何检测蛋白？

蛋白和核酸不一样，具有很强的多样性。Protein A280功能应用于检测那些含有Trp、Tyr残基或者含有Cys-Cys二硫键的纯蛋白，这些蛋白在280nm吸光度明显。本机方法不需要构建标准曲线，而是检测吸光度后，直接计算蛋白浓度。

Protein A280显示紫外吸收光谱，检测280nm处的吸光度后计算浓度（mg/ml）。和核酸检测一样，Protein A280记录显示的是10mm光程下的数据。

Nano-600在基座模式下可以多检测90mg/ml的BSA而不用稀释。

当检测样品的吸光后的光强小于200时（10mm光程下），软件会提示用户选择更小的测量光程，以保证测试的准确性。

决定液体表面张力的主要因素是溶液中水分子之间的氢键，通常情况下，水中的物质，如蛋白、盐离子、去污剂等都会通过破坏水分子之间的氢键来减小表面张力。虽然对于大部分样品来说，1ul的量就足够用于检测了，但由于表面张力下降，我们建议使用2ul的量以保证形成液柱。

可选择或取消基线校准。蛋白检测默认的基线校准波长为340nm，用户可根据试验需要输入不同的校准波长。在任何情况下，基线都自动设定为选择波长下的吸光度，所有波长的吸光度读数都是减去这个值的结果。

注意：基线校准必须在进行样品检测之前设定，样品检测之后设定无效。不选择基线校准，光谱值将会产生偏移，计算的浓度也会改变。

⑵操作步骤：

①设定项目名称和样品编号与蛋白类型；

②使用缓冲液建立空白对照：取2ul空白溶液加到下基座上，放下上基座并点击“空白”；

③使用干净无尘布把基座上的空白溶液擦干净；

④取2ul样品滴加到下基座上，放下上基座，点击“样品”进行检测；

注意：每次检测的样品都必须是刚加入的。

⑤检测完成后，必须用干净的无尘布擦掉上下基座上的样品，才可以检测下一个样品。