漫反射圆二色技术在固体样品对映体比例测定中的应用

一、介绍

制备用于制药工业的纯对映体是强制性安全要求的一部分。圆二色谱法是一种测定对映体纯度的技术，可直接用于固体样品。

多年来，当样品被证明不溶或在更换介质时显示出结构变化时，固体样品的圆二色性测量一直使用颗粒法进行。颗粒的制备并不简单，也很耗时。使用积分球测量漫反射圆二色附件在MOS-500圆二色光谱仪上几分钟即可完成，是颗粒法的替代方案。本申请说明说明了使用漫反射圆二色附件测定丙氨酸制剂（L和D形式的粉末混合物）的对映体纯度。

二、漫反射圆二色附件测试原理

积分球直接安装在MOS-500圆二色光谱仪光学台的出口处，因此入射光直接照射固体样品。探测器安装在90°的位置，使用扩散挡板保护样品免受直接反射。积分球的内涂层经过精心选择，以提供从远紫外到近红外区域的最高反射。探测器连续收集漫反射，因此MOS-500圆二色光谱仪可以根据用户要求生成漫反射圆二色谱和漫反射线二色谱。

使用漫反射线性二向色谱作为质量测量，以检查样品架和积分球的石英窗是否存在可能扭曲漫反射圆二色谱信号的偏振效应。

三、实验条件

所有光谱均在200 nm至300 nm范围内记录，且无需使用氮气清洗光学元件，因此在该配置中运行成本很低。使用0.25 nm的数据间隔和4 nm的带宽测量光谱。对每个粉末样品进行单一光谱分析，以下仅显示原始数据（无平滑）。

纯D-丙氨酸和L-丙氨酸粉末从Sigma Aldrich获得，用于参考和制备不同的对映体混合物。

所有粉末均使用研钵和杵研磨，以获得薄而均匀的粉末。然后将粉末包装在固体样品架中。

四、纯对映体的圆二色谱和线二色谱

首先测量纯对映体的圆二色光谱，以检查样品制备的质量和测量的圆二色谱信号的完整性。L-丙氨酸和D-丙氨酸的光谱如图2所示。

图2：L-丙氨酸（蓝线）和D-丙氨酸（红线）的圆二色光谱

这两个光谱是符合理论预期的镜像。峰值在214 nm处测得，mdeg振幅为±31.8。

在样品不变的情况下，还记录漫反射线二色光谱，以检查线性二色性水平，如图3所示。

图3：L-丙氨酸（蓝线）和D-丙氨酸（红线）的漫反射线二色光谱

漫反射线二色的信号强度中，L-丙氨酸的低于0.0008 △A，D-丙氨酸的低于0.0005 △A，这样的强度对CD测量几乎没有影响。与其他制造商报告的值相比，我们设计的仪器更好，线二色效应对比其他机器小4-5倍。

五、已知比例样品的圆二色谱和线二色谱

用D-丙氨酸和L-丙氨酸的不同混合物制备两种粉末。样品A通过混合50%的L-丙氨酸和50%的D-丙氨酸制备。将75%的L-丙氨酸与25%的D-丙氨酸混合制备样品B。粉末在研磨前充分混合。

圆二色光谱如图4所示。样品A是一种外消旋混合物，不显示圆二色谱信号。两种对映体以相反的方式作用（图2所示的镜像效应），对圆二色光谱的贡献相等。样品B显示了L-丙氨酸的主要贡献，最大CD信号为15.9 mdeg。该值与纯对映体振幅测量得到的理论值*一致。

图4：纯L-丙氨酸（蓝线）和消旋混合物A（红线）和样品B（黑线）的圆二色光谱

六、未知样品

采用相同的方法制备L-丙氨酸和D-丙氨酸成分未知的样品C。样品C的圆二色光谱如图5所示。

图5：纯L-丙氨酸（蓝线）和未知混合物C（红线）的圆二色光谱

样品C的最大圆二色光谱信号为28.1 mdeg。该圆二色光谱对应于94.2%的L-丙氨酸和5.8%的D-丙氨酸的混合物。

七、结论

MOS-500圆二色光谱仪的漫反射圆二色附件为测定某些固体样品的对映体比例提供了可能性。它显示了偏振影响可忽略和样品制备可靠性。本应用还显示了漫反射圆二色附件直至200 nm测试的性能，无需用氮气吹扫光学元件。